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【專刊】為什麼要選擇多株抗體來進行IHC,IF實驗 10903

【專刊】為什麼要選擇多株抗體來進行IHC,IF實驗
 
我們都知道在製備IHC / IF樣品時,特別是石蠟包埋的過程中,化學和物理性的處理可能會破壞或阻斷目標蛋白(抗原)中的某些epitope。導致只能辨認單一epitope的單株抗體無法偵測到特定抗原。反之,由於多株抗體能夠辨認同一抗原上多個epitope,因此仍可透過結合其他epitope來辨認目標蛋白。

高品質的多株抗體是由辨認抗原上的不同位置epitope的多種抗體所組成;因此在進行IHC / IF分析時,每個抗原會接上多個抗體,此特性可以增加靈敏度及增強訊號。

此外,自然界中的蛋白質具有許多不同的變體(variant)。如果epitope以不同的方式呈現,則有可能無法被單株抗體辨認,這將影響蛋白質的偵測。而多株抗體則可透過辨認多個epitope使其不受變體的影響。綜合上述原因,由於靈敏度高,不易受變體影響,許多科學家更喜歡在挑選IHC / IF抗體實選擇多株抗體,而非單株抗體。
 
Formalin-fixed and paraffin embedded rat brain labeled with Rabbit Anti phospho-HSF1 (Ser326) Polyclonal Antibody (bs-3741R) followed by conjugation to the secondary antibody and DAB staining
Formalin-fixed and paraffin embedded rat colon labeled with  Anti-CD8 alpha Polyclonal Antibody (bs-4791R), followed by  secondary antibody was Goat Anti-Rabbit lgG, Cy3 conjugated (bs-0295G-Cy3). DAPI was used to stain the cell nuclei.
 
儘管多株抗體有上述的優勢,但仍有許多單株抗體在IHC / IF應用中表現良好。因此,在決定使用單株抗體還是多株抗體時,基本考慮因素還是要根據實驗的條件和目的。

下面我們總結了每種抗體的一些優點和缺點:

   
多 株 抗 體
(辨認多種epitope)
單 株 抗 體
(辨認單一epitope)
優點
高靈敏度 高專一性
增強訊號 降低交叉反應(Cross reactivity)
即使蛋白質變性(denatured)或構型改變,仍可有很好的表現 若需要對蛋白質表現定量,單株抗體可獲得較好的結果
穩定度高,可耐受PH值或緩衝液的變化 批次差異小
缺點
批次差異大 若蛋白質變性(denatured)或構型改變,可能無法偵測
交叉反應(Cross reactivity)機率較高 較不適用於需要快速與目標蛋白結合的應用
對PH值及緩衝液的變化較為敏感

Bioss提供經過驗證的多株/單株抗體,目前有許多抗體已在科學期刊上應

【知識小學堂】

為何多株抗體比單株抗體對PH及緩衝液的改變具有較好的耐受性?
 
通常,多株抗體和單株抗體之間的穩定性差異歸因於其免疫球蛋白的生物物理多樣性。
單株抗體是由單個B細胞產生的相同免疫球蛋白。
因此這些相同的免疫球蛋白具有相同的PTM和等電點,
並且僅在最佳條件(PH和Ion strength)下才能很好地發揮作用。

多株抗體是由不同的B細胞產生的多種單株抗體混合物。
混合物中的每種單株抗體均具有其獨特的PTM和等電點。
即使未優化實驗條件(PH或Ion strength),
多株抗體中的某些免疫球蛋白(單株抗體)仍可能運作良好,
並顯示出多株抗體的“穩定特性”。